طريقه العمليه للمزارع الطبيه للبكتيريا يدويا:
معنى المزرعه :
توفير الظروف المناسبه للبكتيريا حتى تنمو ليتم اختيار افضل مضاد حيوي على ان يتم كل هذا
Under specific conditions
وتتم علي خطوتين اساسيتين :
1- الزرع Culture.
وذلك باخذى عينه من المكان المتوقع ان يكون في نمو بكتيري ونقوم بزرعها على Media خاصه .
مثال علي ذلك " مزرعه البول" Urine culture وتطلب من المرضى المتوقع لديهم urinary tract infections وايضا في حالات genital infection يتم اخذ مسحه من الافرازات الناتجه كما في حاله مرض السيلان gonorrhoea ايضا في حاله tonsillitis, pharyngitis يتم اخذ مسحه من الحلق throat swab وزراعتها في ظروف مناسبه واختيار المضاد الحيوي المناسب .
عينات التي يمكن زراعتها من سوائل الجسم المختلفه مثل :
Urine, mucus, blood, pus, breast discharge, spinal fluid, vaginal discharge, uretheral discharge, stool ,sputum, conjunctival swab.
امثله لبعض اطباق المزارع بعد 24 ساعه في الحضانه
2- اختبار الحساسيه sensitivity.
وذلك بوضع ديسكات مضادات حيويه منتجه من الشركات المختلفه لتحديد درجه تاثير المضادات الحيويه على اي ميكروبات ناميه في الطبق.
انواع الميديا Media المستخدمه في الزرع :
1- Macconkey medium
وهو للتعرف على البكتيريا المخمره لسكر اللاكتوز ( لون احمر او وردي ) والتي لا تخمره (نفس لون البيئه) وتنمو فيها عائله البكتيريا المعويه.
2- Blood agar
بعض انواع البيئات Media لا تنمو الا بوجود الدم مثل الالتهاب السحائي الوبائي الالتهاب الرئوي.
. بعض انواع البكتيريا تفرز خمائر تذيب كرات الدم الحمراء فيمكن التعرف عليها مثل الانواع المختلفه من المكورات السبحيه. واهميتها في تمييز نوع التحلل الفا ، بيتا ، جاما .
3- chocolate agar
يستخدم في مزارع الالتهاب الرئوي ، السيلان ، الانفلونزا واهميتها ايضا في تميز نمو بكتيريا نيسيريا ، هيموفلص
4- nutrient agar
لعمل الحساسيه ومعرفه المضاد الحيوي المناسب.
ملاحظات هامه عند الزرع :
* يلاحظ عند اخذ العينه باللوبي المعدني التاكد من ملئ دائره اللوب بالعينه واخراجها من الانبوبه باحتراس حيث لا تلمس جدار الانبوبه ويوجد ( sterile swab ) جاهزه بدلا من استعمال اللوب المعدني.
* عند الزرع على الطبق يراعي عدم الضغط على طبق المزرعه مما يؤدي الى تجريح سطح الطبق.
* يلاحظ فتح الطبق بمقدار معين وغلقه بعد وضع المزرعه بسرعه حتى لا تتعرض للتلوث وابعاد الطبق عن التنفس اثناء الزرع لعدم تلوث الطبق في البكتيريا الموجوده في زفير الشخص الذي يزرع المزرعه.
* وضع الطبق في الحضانه بحيث يكون الغطاء للاسفل ويتم قراءه الاذواق في اليوم التالي وتتم القراءه اولا بعمل عد المستعمرات (colony count) وتصنف الاتي :
* اذا لاحظت نمو اكثر من نوعين من المستعمرات على نفس الطبق فان ذلك يعني تلوث ويتوجب طلب عينه اخرى ويتم زرعها.
* اذا كان عدد المستعمرات اقل من 10 مستعمرات فان ذلك يهمل وتعتبر عقيمه no significant growth.
* اذا كان عدد المستعمرات من 10 الى 19 مستعمره فانه يعتبر مشكوك فيها ويتم عمل حساسيه له وتكتب النتيجه النهائيه له.
* اذا كان عدد المستعمرات اكثر من 20 فان ذلك يعتبر نمو حقيقي ويتم عمل اختبار حساسيه له.
ولتحديد نوع الميكروب الذي ظهر على الطبق نقوم بعمل صبغه الجرام كما يلي :
* الاستجابه لصبغه الجرام سالبه او موجبه :
الجدار الخلوي هو الذي يعطي للخليه البكتيريه شكلها ثابت والمميز كما انه يقوم بحمايه محتويات الخليه الداخليه ويتركب الجدار من مادتين هما ماده الكربوهيدرات والبيبتدات .
وتنقسم البكتيريا الى نوعين رئيسيين وذلك وفقا لقدره الجدار على تقبل صبغه الجرام.
1- خلايا بكتيريه موجبه لصبغه جرام ( Gram +Ve)
وهي الخلايا التي يسمح الجدار الخلوي فيها بنفاذ الصبغه مما يؤدي الى تلون السيتوبلازم باللون البنفسجي او الازرق وعند غسل الخلايا بالكحول فان بعض الخلايا لا تسمح بخروج الصبغه مره اخرى وبذلك تحتفظ باللون البنفسجي او الازرق.
2- خلايا بكتيريا سالبه لصبغه جرام (Gram -ve )
هذه البكتيريا لا يستطيع جدارها الاحتفاظ بالصبغه ويمكنها ان تصبغ بصبغه معاكسه مثل صبغه الصفرانين الحمراء .
وتعتبر صبغه جرام من الصفات الهامه في التعرف على البكتيريا ولها دور مهم في تشخيص الكثير من الامراض التي تسببها.